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1. WO2020181947 - METHOD FOR DETECTING ONE OR MORE TARGET NUCLEIC ACID SEQUENCES TO BE TESTED BY SINGLE TUBE AND KIT THEREOF

Publication Number WO/2020/181947
Publication Date 17.09.2020
International Application No. PCT/CN2020/074925
International Filing Date 12.02.2020
IPC
C12Q 1/6851 2018.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
68involving nucleic acids
6844Nucleic acid amplification reactions
6851Quantitative amplification
C12Q 1/70 2006.01
CCHEMISTRY; METALLURGY
12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
1Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
70involving virus or bacteriophage
Applicants
  • 江苏宏微特斯医药科技有限公司 JIANGSU MACRO&MICRO-TEST MED-TECH CO., LTD. [CN]/[CN]
Inventors
  • 刘利成 LIU, Licheng
  • 王华贵 WANG, Huagui
  • 韦仕卯 WEI, Shimao
  • 邹奕君 ZOU, Yijun
Agents
  • 北京汉鼎理利专利代理事务所(特殊普通合伙) LLR CHINA PATENT
Priority Data
201910190405.913.03.2019CN
Publication Language Chinese (ZH)
Filing Language Chinese (ZH)
Designated States
Title
(EN) METHOD FOR DETECTING ONE OR MORE TARGET NUCLEIC ACID SEQUENCES TO BE TESTED BY SINGLE TUBE AND KIT THEREOF
(FR) PROCÉDÉ DE DÉTECTION D'UNE OU DE PLUSIEURS SÉQUENCES D'ACIDES NUCLÉIQUES CIBLES À TESTER PAR UN SEUL TUBE ET KIT ASSOCIÉ
(ZH) 单管检测一种或多种待测目标核酸序列的方法及其试剂盒
Abstract
(EN)
Provided are a method for detecting one or more target nucleic acid sequences to be tested by a single tube and a kit thereof. The method comprises the steps of: designing specific isothermal amplification primers and fluorescent probe RNHPs for each target nucleic acid sequence to be tested, and labeling the fluorescent probe RNHPs for each target nucleic acid sequence to be tested with different fluorescences; in the presence of a ribonuclease RNaseH, isothermally amplifying each target nucleic acid sequence to be tested under the action of a nucleic acid polymerase; and forming hybridization chain products labeled with different fluorescences by means of different target nucleic acid sequences to be tested, thereby achieving multiplex detection of a plurality of target nucleic acid sequences to be tested. In the present invention, on the basis of an isothermal amplification technique, real-time multiplex isothermal detection can be achieved just by introducing a special probe RNHP and combining same with RNaseH2.
(FR)
L'invention concerne un procédé de détection d'une ou de plusieurs séquences d'acides nucléiques cibles à tester par un seul tube et un kit associé. Le procédé comprend les étapes consistant à : concevoir des amorces d'amplification Isotherme spécifiques et des RNHPs de sonde fluorescente pour chaque séquence d'acide nucléique cible à tester, et le marquage de la sonde fluorescente RNHPs pour chaque séquence d'acide nucléique cible à tester avec différentes fluorescences; en présence d'une Ribonucléase RNaseH, amplification isotherme de chaque séquence d'acide nucléique cible à tester sous l'action d'une polymérase d'acide nucléique; et former des produits de chaîne d'hybridation marqués avec différentes fluorescences au moyen de différentes séquences d'acides nucléiques cibles à tester, ce qui permet d'obtenir une détection multiplex d'une pluralité de séquences d'acides nucléiques cibles à tester. Dans la présente invention, sur la base d'une technique d'amplification isotherme, une détection isotherme multiplexe en temps réel peut être obtenue simplement en introduisant une Sonde spéciale RNHP et en combinant celle-ci avec RNaseH2.
(ZH)
本发明提供单管检测一种或多种待测目标核酸序列的方法及其试剂盒。该方法包括针对每种待测目标核酸序列设计特异性等温扩增引物和荧光探针RNHP,每种待测目标核酸序列荧光探针RNHP标记不同的荧光;在核糖核酸酶RNaseH存在下,在核酸聚合酶的作用下等温扩增每种待测目标核酸序列;和通过不同待测目标核酸序列形成带不同荧光标记的杂交链产物,实现多个待测目标核酸序列的多重检测。本发明在等温扩增技术的基础上,只是通过引入一条特殊的探针RNHP并结合RNaseH2就可实现实时多重的等温检测。
Also published as
Latest bibliographic data on file with the International Bureau